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Suphylum Sarcodina

A este suphylum pertenecen los protozoos que se mueven por seudópodos. Se denominan comúnmente amibas  

Generalidades
Este suphylum se caracteriza por incluir microorganismos de una sola célula, a la cual se le observa fácilmente el citoplasma  dividido en dos partes, una externa hialina denominada  ectoplasma, cuyas prolongaciones forman los seudópodos que permiten el desplazamiento de la amiba, y una interna granulosa o endoplasma donde se ubican todas las organelas citoplasmáticas, como vacuolas, aparato de Golgi y un núcleo de aspecto diverso, que le sirve para la reproducción y para la clasificación en géneros. No poseen mitocondrias y apenas se describió recientemente su retículo endoplásmico. Se reproducen asexualmente por fisión binaria transversa y durante su ciclo de vida (ciclo biológico) pasan por los estadios de quiste y trofozoito.
Dentro del ciclo biológico de las amibas, el quiste es el estadio epidemiológicamente importante,  porque es la forma infectante  del parásito y  la encargada de diseminar la infección. Al microscopio de luz se observa como una estructura oval o esférica, de pared gruesa y rígida que  lo hace resistente a los cambios ambientales, y un  citoplasma donde se encuentran los núcleos característicos del género.
El trofozoito es el estadio trófico, realiza todas las funciones celulares, y produce el daño al hospedero, por tanto es el estadio clínicamente importante.
El suphylum Sarcodina incluye amibas  parasitas y de vida libre. Las amibas parasitas del hombre se transmiten por la ingestión de alimentos o aguas contaminadas con materia fecal del hombre que contenga las formas infectantes (quistes) y su hábitat natural es el Tubo digestivo.
Algunas  amibas de vida libre ( Naeglaeria, y Acanthamoeba) que viven normalmente en  aguas de flujo  lento o  estancadas,  pueden penetrar por las fosas nasales e  infectar accidentalmente al hombre, cuando este  se baña en dichas aguas; los parásitos  se localizan en el sistema  nervioso central y en algunas ocasiones en la cornea de usuarios de lentes de contacto.      
Dentro del  suphylum Sarcodina se encuentran tres géneros de importancia médica, dicha clasificación se hace con base en  la morfología del núcleo.


 

1- Género Entamoeba

Poseen un núcleo mas o menos esférico con membrana nuclear clara, definida, revestida  con gránulos de cromatina y un cariosoma pequeño situado en el centro o cerca del mismo, del cual se desprenden unas fibrillas acromáticas (no se tiñen), que lo unen a la membrana nuclear.   
A este género pertenecen cinco  especies :

a-Entamoeba histolytica
b-Entamoeba dispar
c-Entamoeba coli
d-Entamoeba hartmani
f--Entamoeba gingivalis, es la única especie que habita la boca, solo posee forma de trofozoito y el hallazgo en la saliva o sarro dental indica mala higiene bucal


En algunas ocasiones el hombre puede ser infectado por la Entamoeba polecki  propia del cerdo.

2- Género Endolimax

Tiene un núcleo diminuto, esférico o casi esférico, con un cariosoma evidente e irregular y de situación central o excéntrico,  del cual se desprenden unas fibrillas acromáticas que lo unen a la membrana nuclear     
La  especie que parasita al hombre es la Endolimax nana

3- Género Iodamoeba

Posee un núcleo  esférico o casi esférico, con un cariosoma grande  rico en cromatina, de posición central o ligeramente excéntrico, envuelto  por una masa de glóbulos acromáticos, de los cuales se desprende una red bastante tupida de fibrillas acromática que se extienden hasta la membrana nuclear.
La especie que parasita al hombre es la Iodamoeba butchlii
Durante su ciclo biológico pasan por los estadios de quiste y tofozoito y se localizan en el intestino grueso del hombre.

Se comportan como comensales del intestino y su  hallazgo, indica ingestión de materia fecal contaminada con quistes. E histolytica es la única de las amibas intestinales que por factores predisponentes del hospedero y de la misma amiba, le puede causar daño al hospedero y producir un cuadro variado de signos y síntomas  
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Preparaciones microscópicas


Entamoeba histolytica/ E dispar


Son dos especies del género Entamoeba, que con microscopia de luz son  morfológicamente indistinguibles. El hallazgo de quistes y/o trofozoitos debe ser reportado como Entamoeba histolytica/ E dispar, solo  la visualización en la materia fecal de trofozoitos con glóbulos rojos fagocitados hace diagnóstico de Entamoeba histolytica  y da cuenta del cuadro clínico del paciente.


Quiste

Solución salina
Estructura ovoide o esférica, de 10 a 15 μm de diámetro; pared gruesa y bien definida que le da resistencia a los cambios ambientales. En fresco se puede observar con citoplasma liso y sin ningún tipo de estructura citoplasmática,que lo identifica como quiste de Enatomoeba, pero no permite llegar a un diagnóstico de especie (fig1). La observación en fresco de uno o más cuerpos cromatoidales(CC) de extremos romos o en forma de cigarrillo hacen diagnóstico de E histolytica/ E dispar. (fig 2)

Figura 1.

Figura 2.


Tinción con lugol

Figura 3. Son esféricos u ovales con citoplasma ligeramente granuloso. El diagnóstico se hace observando  de uno a cuatro núcleos característicos del género Entamoeba, esto es con membrana definida, tapizada internamente de gránulos de cromatina y un cariosoma pequeño. Mientras más inmaduro menor número de núcleos (1 o 2) y presencia de vacuola de glicógeno que es un carbohidrato que requieren todas las amibas para el metabolismo y la división celular , esta se  tiñe de café oscuro, la cual desaparece en los quistes maduros con 4 núcleos. (fig3)

 

Figura 3.

 

Trofozoito
Solución salina
El trofozoito vivo tienen dimensiones variables, que según el grado de actividad y la cepa del organismo fluctúa entre 10 y 60 μm de diámetro, siendo de mayor tamaño el trofozoito de cepas patógenas; presenta  forma indefinida, membrana plasmática delgada, clara diferencia entre el ectoplasma hialino y el endoplasma finamente granuloso, donde se observan  numerosas vacuolas que pueden contener bacterias, detritos y si es E histolytica también glóbulos rojos. Únicamente en trofozoitos inmóviles o muertos puede observarse un núcleo como una rueda punteada y refringente.
El movimiento del trofozoito, se produce por prolongaciones del ectoplasma que lleva a la formación de seudópodos digitiformes, largos o anchos y romos, que se dan uno a uno y generan un desplazamiento explosivo y unidireccionado, ( fig 4)
Figura 4 .
 
Tinción con lugol
Con esta coloración, el trofozoíto pierde la motilidad, puede conservar la forma indefinida con clara diferencia entre ectoplasma y endoplasma o puede ser redondo; se observa con mayor claridad numerosas vacuolas e inclusiones citoplasmáticas como gránulos, material fagocitado y en algunas oportunidades presencia de vacuola de glicógeno,  puede verse o no, el núcleo característico del género Entamoeba. (fig 5)
Figura 5.

Coloración de Hematoxilina férrica

Para estar completamente seguro del diagnóstico de las especies del género Entamoeba, se debe hacer coloraciones especiales que permitan observar las características del núcleo de cada una de ellas.
Entamoeba histolytica / E dispar  tiene un núcleo de membrana definida, delicada, con gránulos de cromatina distribuidos uniformemente en la parte interna de la membrana y un pequeño cariosoma central; se observa el citoplasma vacuolado con o sin partículas y presencia o no de glóbulos rojos fagocitados.(fig 6)
Figura 6.
   

Entamoeba coli

Quiste
Solución salina
Estructura redonda u ovalada de pared gruesa y definida de 10 a 35 μm de diámetro y citoplasma liso o con pocas inclusiones, lo cual no permite hacer el diagnóstico de especie,(fig 1) pero la presencia de una o mas barras cromatoidales, que terminan en puntas o puntas astilladas, hacen el diagnóstico en fresco de quistes de E. coli ;característica que solo la presentan los quistes inmaduros (fig 7); de igual manera en los quistes inmaduros puede observarse una opacidad que equivale a la vacuola de glicógeno que se tiñe de café oscuro con la tinción de lugol .

Figura 7b.


Lugol

 

Cuando el quiste está inmaduro presenta una vacuola de glicogeno que se tiñe de color café oscuro y tapa el citoplama de la célula, lo cual no permite contar el número de núcleos y no se puede llegar al diagnostico de especie ( Fig 8)


El quiste en lugol se caracteriza por tener un citoplasma más granuloso que el de E histolytica / E dispar, pero el diagnostico lo hace la presencia de 5 o más núcleos característicos del género Entamoeba, la mayoría tienen de 5 a 8 núcleos (fig 9), pero pueden alcanzara 16 o hasta 32 en quistes de gran tamaño.


Figura 8
Figura 9

Trofozoito
Solución salina
Se observa como una masa ameboide e incolora de 15 a 50 μm de diámetro con citoplasma viscoso y un núcleo raras veces visible. El trofozoito activo forma seudópodos cortos y  romos que le dan un movimiento lento y poco direccionado. No presenta diferencia entre ectoplasma y endoplasma.


Lugol  

Se observa con iguales características que en fresco, o se puede ver completamente redondeado y la presencia de un núcleo característico del género Entamoeba. 

Hematoxilina férrica
El trofozoito aparece como una masa redondeada, condensada y gruesa, con una franja pequeña de ectoplasma y un endoplasma muy granuloso, con abundantes vacuolas alimentarias, generalmente llenas de bacterias, nunca eritrocitos y un núcleo esférico de membrana relativamente gruesa y revestida en el interior por placas o gránulos de cromatina, organizada de forma irregular y un cariosoma de volumen moderado de localización  excéntrica.

 
 

Entamoeba hartmani

Quiste
Solución salina
Presenta iguales características morfológicas que E. histolytica/ E. dispar, incluyendo  presencia de uno o más cuerpos cromatoidales en forma de cigarrillo, pero un tamaño semejante a un quiste de E. nana, es decir entre 8-10μm, nunca superior  a 10 μm de diámetro (fig 10)
Figura 10
 
Lugol
Con la tinción de lugol se observan de 1 a 4 núcleos característicos del género Entamoeba, lo que permite  diferenciarlo de los quistes de E nana (fig11)
Figura 11
 
Trofozoito
Solución salina
Son pequeños de 5 a 12 μm de diámetro, con clara diferencia entre ectoplasma y endoplasma, sin diferenciación del núcleo, citoplasma ligeramente granuloso y presencia de vacuolas digestivas con bacterias fagocitadas (fig 12)
Figura 12
 
Lugol
Presenta las mismas características descritas para el trofozoito en solución salina. Con lugol se tiñe su único núcleo, el cual presenta las  características del género Entamoeba, permitiendo diferenciarlo de un trofozoito de E nana (fig13a, 13b).

Figura 13a .

Figura13b

 

Endolimax nana

Quiste  
Solución salina
Estructura de forma esférica, ovoide o elipsoidal, de 5 a 14 μm de diámetro, pared quística resistente y citoplasma liso y claro, pocas veces se observan cuerpos cromatoidales pequeños, esféricos o baciliformes y en algunas ocasiones presencia de 1 a 4 gránulos refringentes (fig14)
Figura 14
 
Lugol
Pequeña estructura esférica, ovoide o elipsoidal, con pared quistica definida, citoplasma verde o amarillo pálido y 1 a 4 núcleos característicos del género Endolimax, los cuales presentan membrana definida sin cromatina y cariosoma voluminoso e irregular que ocupa casi todo el núcleo, esto hace que al microscopio óptico los núcleos se observen como puntos refringente que corresponden a los cariosomas, rara vez presenta vacuola de glicógeno que puede ser pardusca difusa o de bordes definidos (fig15
Figura 15.
 
Trofozoito
Solución salina
 Estructura de 6 a 15 μm de diámetro, presenta citoplasma muy vacuolado y un núcleo raramente visible. El trofozoíto vivo tiene forma indefinida, debido a la rápida formación de varios seudópodos pequeños, romos, hialinos que le dan un movimiento lento, progresivo y no direccionado.Una vez  pierde la movilidad se redondea pero sigue conservando el citoplasma con iguales características (fig16)

Figura 16
Lugol
Teñidos con lugol toma un color amarillo pálido o  café claro, resaltando las vacuolas presentes en el citoplasma y  el núcleo raramente es visible (fig 17  
Figura 17
Hematoxilina férrica
Tinción permanente que resalta las innumerables vacuolas en su citoplasma y. la morfología característica de su único núcleo, con membrana nuclear de grosor intermedio, sin cromatina,  cariosoma voluminoso e  irregular, de posición  central o excéntrica que ocupa casi todo el núcleo  (fig18.
Figura 18
 
Iodamoeba butchlii
Quiste

Solución salina
Estructura esférica, ovalada o irregular, de pared gruesa y definida de 5 a 20 μm de diámetro, citoplasma de granulaciones de diferentes tamaños, la mayoría de las veces presencia de una o dos vacuolas de bordes definidos, que se observan como opacidades en el citoplasma (fig19)

Figura 19
 
Lugol
Resalta las características del citoplasma y tiñe la(s) vacuola (s) de glicógeno de un color café intenso. En algunas ocasiones se pueden visualizar uno y muy rara vez dos núcleos característicos del género Iodamoeba, cuyas estructuras morfológicas se destacan mejor con coloraciones permanentes como hematoxilina férrica. Llama la atención que en algunas ocasiones no se observa la vacuola y por tanto lo que hace el diagnóstico es el citoplasma  característico de granulaciones irregulares (fig 20)
Figura 20
 
Trofozoito
Solución Salina
Tiene igual tamaño y características que  el quiste, pero su forma siempre es indefinida debido a la formación de varios seudópodos pequeños, romos,  hialinos que le dan un movimiento lento no direccionado y poca diferencia entre ectoplasma y endoplasma (fig21)

Figura 21
 
Lugol
Se observa con las mismas características del trofozoito en solución salina, con citoplasma amarillo lleno de granulaciones irregulares, vacuola(s) de glicógeno  de color café intenso y forma indefinida, ocasionalmente se observa  un  núcleo característico del género Iodamoeba (fig 22)
Figura 22
Hematoxilina férrica
Se observan muy bien las características del citoplasma, la vacuola no toma la coloración y se visualiza claramente el núcleo, de membrana gruesa y definida, con un cariosoma grande con aspecto de rueda dentada, dado por la presencia de gránulos acromáticos localizados en su periferia que no toman la coloración. Posee muchos gránulos de cromatina dispersos entre el cariosoma y la membrana nuclear.
 


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